■ 基本信息
啟動(dòng)子: | Trc |
復(fù)制子: | pBR322 |
終止子: | rrnB T2 |
質(zhì)粒分類: | 大腸桿菌載體；pTrc系列表達(dá)質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 4414bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-His，N-EK，N-Xpress |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度，37℃，有氧，LB |
表達(dá)宿主: | 大腸桿菌 |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測(cè)序引物: | pTrcHis-F: GAGGTATATATTAATGTATCG |
3'測(cè)序引物: | pTrcHis-R:GATTTAATCTGTATCAGG |
備注: | pTrc表達(dá)質(zhì)粒 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標(biāo)記: |
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■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pTrcHis載體是來(lái)由pBR322質(zhì)粒衍生而來(lái)的表達(dá)載體,設(shè)計(jì)用來(lái)在大腸桿菌中進(jìn)行重組蛋白的高效表達(dá)和純化。載體上的Trc啟動(dòng)子和rrnB抗終止區(qū)使得高水平蛋白表達(dá)成為可能.Trc啟動(dòng)子由Trp啟動(dòng)子的-35區(qū)域和Lac啟動(dòng)子的-10區(qū)域共同組成。pTrcHis載體同時(shí)包含有一個(gè)LacIq基因，該基因編碼了Lac啟動(dòng)子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+還是LacIq-都可以高效抑制插入基因的轉(zhuǎn)錄。進(jìn)行蛋白表達(dá)時(shí)，大腸桿菌需要生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，誘導(dǎo)表達(dá)。載體上pTrcHis載體是來(lái)由pBR322質(zhì)粒衍生而來(lái)的表達(dá)載體,設(shè)計(jì)用來(lái)在大腸桿菌中進(jìn)行重組蛋白的高效表達(dá)和純化。載體上的Trc啟動(dòng)子和rrnB抗終止區(qū)使得高水平蛋白表達(dá)成為可能.Trc啟動(dòng)子由Trp啟動(dòng)子的-35區(qū)域和Lac啟動(dòng)子的-10區(qū)域共同組成。pTrcHis載體同時(shí)包含有一個(gè)LacIq基因，該基因編碼了Lac啟動(dòng)子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+還是LacIq-都可以高效抑制插入基因的轉(zhuǎn)錄。進(jìn)行蛋白表達(dá)時(shí)，大腸桿菌需要生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，誘導(dǎo)表達(dá)。載體上的迷你順?lè)醋咏Y(jié)構(gòu)能夠增強(qiáng)插入基因的轉(zhuǎn)錄水平，從而高水平表達(dá)目的蛋白。DNA插入片段位于載體表達(dá)片段下游，在其上游有一個(gè)N-端融合表達(dá)多肽序列，該序列包含有ATG起始密碼子，6xHis標(biāo)簽，T7噬菌體10號(hào)基因的翻譯增強(qiáng)子，X press抗原表位，腸激酶酶切識(shí)別位點(diǎn)的迷你順?lè)醋咏Y(jié)構(gòu)，能夠增強(qiáng)插入基因的轉(zhuǎn)錄水平，從而高水平表達(dá)目的蛋白。DNA插入片段位于載體表達(dá)片段下游，在其上游有一個(gè)N-端融合表達(dá)多肽序列，該序列包含有ATG起始密碼子，6xHis標(biāo)簽，T7噬菌體10號(hào)基因的翻譯增強(qiáng)子，X press抗原表位，腸激酶酶切識(shí)別位點(diǎn)。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK1611 pTrcHisA大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
