■ 基本信息
別名: | pColdGST |
啟動(dòng)子: | CSPA |
復(fù)制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類: | 大腸桿菌載體；pCold系列表達(dá)質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 5097bp |
質(zhì)粒標(biāo)簽: | N-GST, N-HRV 3C蛋白酶切位點(diǎn),N-His |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37度 |
表達(dá)宿主: | 大腸桿菌 |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
誘導(dǎo)方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測(cè)序引物: | pCold Forward:5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3 |
3'測(cè)序引物:
| pCold Reverse 5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3 |
功能簡(jiǎn)介: | pCold-GST載體表達(dá)GST融合蛋白，GST標(biāo)簽可以提高目的蛋白的可溶性，提高目的蛋白的純度。 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達(dá) |
片段類型: | ORF
|
片段物種: | 空載體
|
原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
|
熒光標(biāo)記: |
|
■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介
pCold GST DNA在冷休克載體的基礎(chǔ)上，整合了來源于Schistosoma japonicum的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione S-transferases, GST)可溶性標(biāo)簽。通過GST在目的蛋白質(zhì)N末端的融合表達(dá)，可提高融合蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和可溶性。本制品在cspA啟動(dòng)子的下游插入了5’非編碼區(qū)（5’-UTR）、翻譯增強(qiáng)元件（TEE）、His標(biāo)簽、GST標(biāo)簽和多克隆位點(diǎn)（MCS）（下圖）。此外，在cspA啟動(dòng)子下游還插入了可以嚴(yán)格調(diào)控目的基因表達(dá)的lac operator。GST標(biāo)簽融合蛋白質(zhì)可進(jìn)行高親和性純化。在GST標(biāo)簽和多克隆位點(diǎn)（MCS）之間插入了高特異性HRV 3C Protease 的識(shí)別序列，可從融合蛋白質(zhì)中去除標(biāo)簽。HRV 3C Protease的最適溫度為4～5℃，可以在溫和的條件下進(jìn)行目的蛋白質(zhì)的標(biāo)簽去除反應(yīng)。pCold 系列載體的啟動(dòng)子是大腸桿菌來源的，所以大部分大腸桿菌都可以作為表達(dá)宿主使用。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：
ZK1596 pCold-GST大腸表達(dá)質(zhì)粒.txt
