■ 基本信息
別名: | pColdSUMO |
啟動子: | CSPA |
復制子: | pBR322 |
質(zhì)粒分類: | 大腸系列質(zhì)粒；大腸表達質(zhì)粒；pCold系列質(zhì)粒 |
質(zhì)粒大小: | 4740bp |
質(zhì)粒標簽: | N-His, N-SUMO |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37℃ |
表達宿主: | BL21等大腸桿菌 |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測序引物: | pCold-F（ACGCCATATCGCCGAAAGG） |
3'測序引物:
| pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
備注: | 冷休克表達載體 |
■ 質(zhì)粒屬性
質(zhì)粒宿主: | 大腸桿菌 |
質(zhì)粒用途: | 蛋白表達 |
片段類型: | 基因CDS
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質(zhì)粒簡介
原核表達載體(pCold-SUMO)是在 pCold 載體基礎上改造而成，該載體啟動子(CS Promoter)來源于南極嗜冷細菌，在低溫下(15 度)才能啟動蛋白的表達。低溫下細菌生長緩慢，使得蛋白合成速度減慢，從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率，提高了蛋白可溶性表達，增強了活性蛋白的表達比率。該表達系統(tǒng)所包含的 SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達量，而且進一步提高了蛋白的可溶表達幾率。TEE信號肽可增強冷啟動子調(diào)控下目的蛋白的高表達。
pCold-SUMO質(zhì)粒是利用冷休克基因CSPA啟動子設計高效率蛋白質(zhì)表達載體。在E.COLI啟動子下游處，插入了lac操縱子，以便嚴格控制表達。此外，5’非翻譯區(qū)（5’UTR），翻譯增強元件（TEE）,His標簽序列，Xa因子切割位點和多克隆位點（MCS）位于CAPS啟動子的下游。當培養(yǎng)溫度切換到低溫時，大腸桿菌暫時停止生長，大部分的大腸桿菌蛋白質(zhì)表達減少，但是一類稱為冷休克蛋白的蛋白質(zhì)被特異性誘導表達。
■ 質(zhì)粒圖譜
■ 質(zhì)粒序列
質(zhì)粒序列請下載：
ZK1593 pCold-SUMO大腸表達質(zhì)粒.txt
