■ 基本信息
別名: | pET28a |
啟動子: | T7 |
復制子: | pBR322 |
終止子: | T7 terminator |
質粒分類: | 大腸系列質粒；大腸表達質粒；pET系列質粒 |
質粒大小: | 5369bp |
質粒標簽: | N-6×His, N-Thrombin, N-T7, C-6×His |
原核抗性: | Kan |
克隆菌株: | DH5a |
培養(yǎng)條件: | 37℃，有氧，LB |
表達宿主: | 大腸桿菌BL21(DE3) |
誘導方式: | IPTG或乳糖及其類似物 |
5'測序引物: | T7：TAATACGACTCACTATAGGG |
3'測序引物: | T7-ter：TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
■ 質粒屬性
質粒宿主: | 大腸桿菌 |
質粒用途: | 蛋白表達 |
片段類型: | ORF
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片段物種: | 空載體
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原核抗性: | Kan |
真核抗性: |
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熒光標記: |
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■ 質粒簡介
pET-28a質粒是一種原核表達載體，C端含有一個6×His標簽，N端含有6×His標簽、thrombin酶切位點、T7標簽。該質粒含有多個常用的酶切位點，便于不同基因克隆。表達由宿主細胞提供的T7 RNA聚合酶誘導，目的基因被克隆到質粒載體上，受噬菌體強轉錄及翻譯信號控制。pET28a載體的單一的多克隆位點見上面的環(huán)狀質粒圖譜。注意：載體序列是以pBR322質粒的編碼規(guī)矩進行編碼的，所以T7蛋白表達區(qū)在質粒圖譜上面是反向的。T7 RNA聚合酶啟動的克隆和表達區(qū)域在質粒圖譜中也被標注了出來。質粒的F1復制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒粒子能夠產(chǎn)生，并啟動蛋白表達，同時蛋白表達將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。pET系統(tǒng)是有史以來在大腸桿菌中表達重組蛋白的功能最強大的系統(tǒng)，也是現(xiàn)今原核表達方面使用最廣泛的系統(tǒng)。該系列質粒能很容易的通過降低誘導物的濃度來削弱蛋白表達。在非誘導條件下，可以使目的基因處于完全沉默狀態(tài)而不轉錄。 質粒只保證關鍵序列正確，不保證表達效果。
■ 質粒圖譜
■ 質粒序列
質粒序列請下載：
ZK159pET-28a大腸表達質粒.txt
